El Repositorio Académico Digital de la Universidad ORT Uruguay es un espacio para almacenar, organizar, preservar, dar libre acceso y visibilidad a nivel nacional e internacional de la producción científica, académica y cultural generada por los integrantes de la comunidad universitaria, en formato digital.
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Contribución a la validación experimental del poro putativo de Tmem176b como potencial blanco farmacológico para tratamiento oncológico
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Trias Pita, Joaquín Carlos; Hill Mongabure, Marcelo Rafael; Rammauro Sanguinetti, María Florencia; Mondino, Sonia Soledad
El presente trabajo final de carrera tiene como objetivo general la caracterización experimental del poro putativo identificado en Tmem176b (también conocido como Tolerance Related and InduceD; TORID) y la puesta a punto de un modelo murino de cáncer de colon. TORID promueve el desarrollo tumoral a través de la disminución de mecanismos efectores de la inmunidad. Esto abre como perspectiva la utilización de inhibidores de TORID como una nueva inmunoterapia antitumoral. Se aspira a avanzar hacia el desarrollo racional de nuevos compuestos, basados en conocimiento estructural de Tmem176b, estudiando la interacción física entre Tmem176b y BayK8644 a través de la técnica de “photoaffinity labelling”. Para poder interpretar la información que surja de ese experimento, se debe determinar cómo está conformado el poro por el cual transitan los iones a través de la proteína. Dado que una de las perspectivas de este trabajo a corto plazo es evaluar nuevos inhibidores de Tmem176b in vivo, se comenzó también a poner a punto un modelo murino de cáncer de colon con el que se evaluaran nuevos inhibidores de Tmem176b. Se analizaron un total de seis mutantes de residuos aminoacídicos. Se cree que estas mutaciones pueden influir en la modulación de la actividad del canal y podrían dejar en evidencia el rol del aminoácido que fue mutado para la actividad del canal iónico. Entre los resultados se indica que dicha mutación se trata de una “loss of function” la cual bloquea totalmente la actividad de TORID. Se concluye que los resultados obtenidos muestran que existen residuos aminoacídicos claves en el canal iónico, que, al ser sustituidos o bloqueados, desencadenan en una modulación inhibitoria de la actividad de TORID. Esto abre como perspectiva la utilización de estos aminoácidos como potenciales blancos de fármacos inhibidores de TORID como nuevas terapias antitumorales. Estas terapias deberían evaluarse en modelos murinos optimizados.
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Desarrollo de tecnologías de residuo cero para la producción de plásticos termoformables a partir de orujo de uva
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Falero Arias, Ana Paula; Teguer Levy, Lea; Lopretti Correa, Mary Isabel; Umpiérrez Failache, Mariana; Machado Casini, Felipe Daniel; Martínez Núñez, Guadalupe Alejandra
El orujo de uva es el principal residuo de la industria vinícola. Se ha estudiado la producción de bioplásticos a partir de orujo, generando un gran interés debido al problema ambiental que representan los plásticos derivados del petróleo. El presente trabajo final de carrera se dedicó a la creación de una técnica de residuo cero. Se diseñó un innovador bioproceso que revaloriza el orujo de uva y del cual se logró obtener dos productos finales; un bioplástico biodegradable denominado PHB y un copolímero. Ambos productos están dirigidos a ser utilizados por la industria vitivinícola, apoyando la idea de una economía circular. Se utilizó el residuo como fuente de nutrientes para el cultivo de C. necator y B.ginsengi. Para ambas bacterias se realizó una identificación molecular, que confirmó su identidad y una prueba de screening que arrojó un resultado positivo para producción de PHB, reportándose por primera vez la producción del biopolímero por B.ginsengi. Por otro lado, se logró extraer del orujo de uva 4.07 g/L de glucosa y 5.36 g/L de fructosa, a partir de un pretratamiento de hidrólisis ácida. El extracto fue incorporado en medio YEM, obteniéndose un Yp/x de 0,4567, un Qx de 0,0053 q/L.h y un Qp de 0,0050 g/L.h para la bacteria B.ginsengi. C.necator reportó los valores de Yp/x de 0,3063, Qx de 0,0008 g/L.h y Qp de 0,0020 g/L.h. Se realizó un proceso de extracción de PHB para ambas bacterias y se analizó las muestras por FTIR. Por otro lado, se logró obtener un copolímero con relación 20:80 de polvo de orujo y bioplástico respectivamente. Estos resultados muestran que es posible la generación de PHB y del copolímero. Para finalizar, se estudia cómo se llevaría a cabo el proyecto a escala industrial y se realiza el análisis económico del mismo.
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Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Saravia Silvera, Evangelina; Vila Varela, Delfina; Ortiz Carrión, Cecilia Carolina; Jackson Carvalho, Erienne; Pirotti Corrales, Florencia Daniela
En el siguiente trabajo final de carrera se expresan dos enzimas terapéuticas claves para el tratamiento del cáncer: la CD y la UPRT, en cuatro cepas de expresión diferentes provenientes de Escherichia coli. Estas dos enzimas se presentan como candidatos terapéuticos para desarrollar estrategias dirigidas a sitios específicos en el cuerpo afectados por el cáncer, para poder así aumentar la efectividad y reducir los efectos adversos. Recientes avances en genómica, proteómica y biología molecular han permitido la expresión de proteínas heterólogas en sistemas biológicos. La cepa bacteriana Escherichia coli se destaca como un sistema de expresión, debido al amplio conocimiento con respecto a su metabolismo, fisiología y genética, así como a la gran variedad disponible de vectores para la producción de proteínas recombinantes con costos reducidos y alta eficiencia. La evaluación de estas permitió identificar a la cepa BL21(DE3) como el mejor sistema de expresión para escalar satisfactoriamente la expresión. Las proteínas terapéuticas presentaron un elevado grado de pureza, mayor a 90%, luego de dos pasos cromatográficos que incluyeron una cromatografía de afinidad por quelatos metálicos y una cromatografía de exclusión molecular. Además, se colectó información novedosa con respecto a la conformación oligomérica en solución de las enzimas. Finalmente, en esta tesis se generaron inmovilizados activos conteniendo una variante mejorada de CD, CD_S126R, por atrapamiento en sílica biomimética. Los mismos presentaron un porcentaje de inmovilización y rendimiento del 96% y 55%, respectivamente. Los datos recuperados resultan alentadores para continuar avanzando hacia una estrategia terapéutica combinada, basada en el par CD/UPRT.
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Utilización de microalgas en el manejo sustentable de efluentes de tambo
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Regina Lucas de Olivera, Matías; Segovia Olivera, María Clara; Umpierrez Failache, Mariana; Lopretti Correa, Mary Isabel; Sanabria Keochgerian, Analía; Zinola Garcia, Oscar Guillermo
El presente trabajo final de carrera se enmarca en la búsqueda de mejoras en la gestión de los efluentes de tambos, centrándose especialmente en el uso de microalgas y su capacidad para eliminar contaminantes de aguas residuales. Se probó la tolerancia y adaptabilidad de diferentes cepas de microalgas, incluido un aislamiento nativo, a diferentes condiciones ambientales. Además, para cada cepa se determinó la cinética de crecimiento en condiciones estacionales de temperatura y fotoperiodo, observándose las mayores velocidades para las condiciones asociadas a la temporada de verano. En cuanto a la remoción de nutrientes, los resultados del sistema planteado muestran tasas de eliminación de fosforo de 98%. En particular, se estudió la sinergia de diferentes cepas en un consorcio, para aumentar la eficiencia en diferentes condiciones ambientales. Finalmente, para aportar al establecimiento de un proceso circular, se evaluó la valorización de la biomasa obtenida en el tratamiento, analizándose el contenido de lípidos y proteínas de la biomasa seca para las cepas trabajadas. Todos los hallazgos probados primero a escala de laboratorio se experimentaron en una escala piloto, en condiciones ambientales reales, donde se determinó el potencial de remediación del sistema de manejo generado a escala completa, para un establecimiento lechero de 260 vacas. De esta los resultados obtenidos sientan las bases para el desarrollo de un novedoso sistema de gestión de efluentes, que aporte al avance en materia de sustentabilidad de los establecimientos lecheros en Uruguay, enmarcado en un contexto de economía circular.
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Generación de un plásmido de transferencia conteniendo un gen con potencial inmunogénico contra la diarrea viral bovina
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Rodriguez Ferragut, Joaquin; Wajsblat Sbeghen,Milena; Umpiérrez Failache, Mariana; Mulet Navarro, Ana Paula; Vigo Pérez, Sebastián
La Diarrea Viral Bovina es una enfermedad endémica que afecta al ganado bovino con gran impacto económico, tanto a nivel internacional como nacional. A pesar de que algunos países la han erradicado con éxito, en muchas partes del mundo todavía es frecuente. En nuestro país este problema es relevante y aún ha sido poco estudiado. Si bien la vacunación ha demostrado ser una herramienta efectiva para disminuir su impacto, todavía quedan grandes desafíos de mejora. Por ese motivo, este trabajo final de carrera se propuso implementar la primera etapa del sistema de expresión vectorial con Baculovirus con el objetivo de generar un plásmido de transferencia recombinante que contenga el gen de la proteína viral E2. Se llevó a cabo el diseño in silico de cebadores y se corroboró su capacidad de amplificar específicamente el gen que codifica para la glicoproteína E2. Se clonó dicho producto de amplificación adecuadamente en el plásmido de transferencia pFastBac1. Asimismo, y en paralelo, se generaron bancos de células de insecto Spodoptera frugiperda, logrando adaptar su crecimiento tanto en crecimiento en adherencia como en suspensión. Finalmente se logró generar un plásmido de transferencia recombinante que contiene el gen que codifica la proteína E2, principal proteína inmunogénica presente en la envoltura de BVD-2, que luego podrá ser utilizado con el sistema de expresión vectorial con Baculovirus. Los resultados de este trabajo son prometedores a efectos de continuar profundizando esta línea de investigación con gran aplicación industrial. La inclusión de una subunidad recombinante en la formulación podría elevar la eficacia y mejorar el nivel de protección animal. Además, presentan seguridad inherente al no requerir de virus vivos. Las vacunas recombinantes ofrecen una alternativa más segura y eficaz, reduciendo el riesgo de reacciones adversas y simplificando el proceso de fabricación.