Ingeniería de proteínas para elucidar el mecanismo de glutarredoxinas

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dc.contributor.advisorManta Porteiro, Brunoes
dc.contributor.advisorFerrer Sueta, Gerardoes
dc.contributor.tribunalSantos, Javieres
dc.contributor.tribunalFló Díaz, Martínes
dc.creatorGrunberg Eskenazi, Karin
dc.date.accessioned2017-06-14T14:51:50Z
dc.date.available2017-06-14T14:51:50Z
dc.date.issued2016es
dc.descriptionIncluye bibliografía y anexoses
dc.description.abstractEn el presente proyecto, se utilizaron técnicas de ingeniería de proteínas y enzimología para abordar las bases estructurales y cinéticas de las diferencias entre glutarredoxinas (Grx) de clase I y clase II. En base a comparación de secuencias y estructuras, se generaron variantes con mutaciones puntuales o intercambiando elementos de secuencia para convertir Grx de clase I en clase II y viceversa. Adicionalmente, se generaron versiones “humanizadas” de Grx de tripanosomas con el objetivo de analizar los determinantes estructurales de la selectividad por tripanotión. Las proteínas se expresaron y purificaron mediante cromatografía de afinidad y se evaluó la pureza mediante electroforesis desnaturalizante, espectrometría de masa y cromatografía de exclusión molecular analítica. La actividad reductasa de las diferentes variantes se determinó mediante ensayos estándar de actividad Grx (reducción de disulfuro mixto entre GSH y β-mercaptoetanol) y tiorredoxina (reducción de insulina), mientras que la reacción con oxidantes se estudió por espectroscopía de fluorescencia. Por lo tanto, se aportó a la comprensión del mecanismo de Grx, el cual es relevante para entender la biología de estas proteínas. Se confirmó que las Grx de clase II estudiadas son inactivas en el ensayo HED mientras que las de clase I son activas. Los experimentos con versiones ingenierizadas demostraron que la estructura en torno al sitio activo (cercana en secuencia y en el espacio) es esencial para la actividad de las Grx de clase I.es
dc.format.extent77 p. fot., tbls., grafses
dc.identifier.citationGrunberg Eskenazi, K. (2016). Ingeniería de proteínas para elucidar el mecanismo de glutarredoxinas (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/3324es
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11968/3324
dc.languageEspañoles
dc.publisherUniversidad ORT Uruguayes
dc.relation.otherhttps://bibliotecas.ort.edu.uy/bibid/84389es
dc.subjectBIOPROCESAMIENTOes
dc.subjectENZIMOLOGÍAes
dc.subjectPROYECTOS-BIes
dc.subjectINGENIERÍA BIOQUÍMICA-PROCESOS DE SEPARACIÓNes
dc.subjectPROTEÍNASes
dc.titleIngeniería de proteínas para elucidar el mecanismo de glutarredoxinases
dc.typeTrabajo final de carreraes
ort.thesis.careerFI - Ingeniería en Biotecnología - BIes
ort.thesis.degreegrantorFacultad de Ingenieríaes
ort.thesis.degreelevelCarrera Universitariaes
ort.thesis.degreenameIngeniera en Biotecnologíaes
ort.thesis.degreetypeTrabajo final de carreraes
ort.thesis.noteTrabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingenieríaes
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