Trabajos finales de carrera de grado

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Estos trabajos de fin de carrera son obras producidas por estudiantes, que se originan en los procesos formativos de la universidad.

Tienen propósitos culturales y educativos. No son productos comerciales y su difusión pública no está autorizada.

Recent Submissions

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    Mejoras en el proceso de producción de antígeno de virus de la rabia
    (Universidad ORT Uruguay, 2022) Carballo Mariño, Julieta; Grötiuz Scarella, Adolfo German; Campos Perelló, Lucía; Acuña Gonzalez, Patricia Nieves; Blanc Pintos, Andrea María
    El siguiente trabajo final de carrera tiene como objetivo establecer mejoras en el proceso de producción del antígeno rábico. Virbac Uruguay es un laboratorio de producción de vacunas y fármacos de uso animal que produce vacunas de rabia principalmente para uso en perros, gatos y bovinos. Debido al aumento creciente de la demanda es necesario mejorar los rendimientos productivos. Se realizó el “scale-down” del proceso productivo en un biorreactor de pruebas de 15 L. Se generó un Banco de Trabajo Viral para realizar pruebas a futuro en el biorreactor de pruebas, obteniendo un título viral similar superior a la media de títulos de 2020 en producción industrial. Se estableció un sistema de perfusión discontinua con el que se alcanzó una concentración celular de 6E6 células/mL; máximo histórico de crecimiento celular. Se evaluaron diversos procesamientos "downstream" en escala laboratorio. Se seleccionó una cascada clarificante consistente en la centrifugación del antígeno por 15 minutos a 1300 rpm y como único paso de microfiltración un filtro EAV o Preflow; con una pérdida de antígeno en promedio inferior al 21%. Se seleccionó un proceso de ultrafiltración con factor de concentración volumétrico 10X, con una pérdida promedio de 23% de antígeno viral. y un proceso de diafiltración con 10 volúmenes de diafiltrado agregados de 2 en 2, utilizando solución estabilizadora como "buffer" diafiltrante. Se considera que la implementación de estas mejoras, aplicadas tanto en el contexto de pruebas como a futuro en producción, permitirán un mayor rendimiento del antígeno de virus de la rabia producido en las instalaciones de Virbac Uruguay.
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    Implementación de mutagénesis en un solo paso y rescate genético en Escherichia coli para la dilucidación de la biosíntesis de la ubiquinona
    (Universidad ORT Uruguay, 2023) Fontes Cunha, Mariel Andrea; Salinas Grecco, Marcos Gustavo; Manta Porteiro, Bruno; Pórfido, Jorge Luis; Mulet Navarro, Ana Paula
    La ubiquinona (UQ) o coenzima Q es un lípido esencial de las membranas que desempeña un papel central en la cadena de transporte de electrones en todos los seres vivos, debido a que es móvil y capaz de aceptar y ceder electrones. Aunque la biosíntesis de UQ está bien comprendida en procariotas, aún persisten incógnitas en la de eucariotas, particularmente en los pasos de descarboxilación e hidroxilación del carbono 1 del anillo de benzoquinona. Estos procesos son llevados a cabo por las enzimas UbiD y UbiH en Escherichia coli, lo que hace que esta sea un modelo para investigar y evaluar las funciones de genes candidatos eucariotas. La UQ es de vital importancia y sus deficiencias, en especial las relacionadas con irregularidades en la vía de biosíntesis (deficiencias primarias), pueden desencadenar enfermedades mitocondriales graves que pueden resultar en la muerte temprana del paciente o afectar a órganos con altos requerimientos energéticos. Además, la gravedad y la duración de los síntomas pueden variar considerablemente entre las personas afectadas y la mayoría de los casos clínicos notificados carecen de un diagnóstico molecular que identifique la mutación genética subyacente, lo que resalta la necesidad de investigar la biosíntesis de UQ. El siguiente trabajo de grado propone una puesta a punto de una herramienta de cribado para identificar cepas bacterianas con deficiencias en la biosíntesis de UQ. Se estandarizó un protocolo de mutagénesis dirigida en Escherichia coli para crear cepas mutantes en genes responsables de la biosíntesis (en particular se generó una cepa mutante en ubiD) y se realizó la puesta a punto de la técnica de rescate fenotípico (funcional) homólogo al clonar un gen nativo de interés (ubiH) en plásmidos de expresión para transformar cepas mutantes en dicho gen. Estas herramientas son vitales para futuros estudios de genes eucariotas y su función en la biosíntesis de UQ a través de la observación del rescate funcional heterólogo.
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    Puesta a punto de la producción y purificación de partículas similares a virus del Circovirus Porcino tipo 2 como prototipo vacunal
    (Universidad ORT Uruguay, 2023) Fadel Silva, Florencia Natalia; Ortega Flores, Claudia Karina; Olivero Deibe, Natalia; Pagotto, Romina María del Lujan; Bengochea Olveira, Virginia Valeria
    En este trabajo de grado se realiza la puesta a punto de la producción de Partículas Similares a Virus (VLPs) de Circovirus Porcino tipo 2 (PCV2) mediante la transfección transitoria de la línea celular de mamífero Expi293F, utilizando el método de polietilenimina (PEI). Se optimizó el proceso mediante evaluación del rendimiento incluyendo, tiempos de transfección, concentración de ADN utilizada y desarrollo de diferentes métodos de purificación. Mediante estudios bioquímicos y biofísicos se realizó la caracterización de la proteína Cap de PCV2 y de las VLPs purificadas. También se realizaron ensayos de inmunofluorescencia indirecta y se evaluó la antigenicidad de las VLPs mediante ELISA utilizando sueros de porcinos infectados, no infectados y vacunados. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. En conjunto, los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala de laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. Los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal.
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    Síntesis, caracterización y función biológica de nanopartículas de plata funcionalizadas con ceftriaxona
    (Universidad ORT Uruguay, 2023) Rodriguez Suárez, Agustin Sebastián; Cruz Jorge, Erlen Yizenia; Scavone Guillermo, Paola; Robino, Luciana; Mendía Doyenart, Carlos Zelmar
    En este trabajo de grado se realizó la síntesis, caracterización y evaluación de la función biológica de nanopartículas de plata (AgNPs) funcionalizadas con ceftriaxona (CRO), un antibiótico modelo, sobre las bacterias P. aeruginosa y S. aureus en forma planctónica y en biofilm, como posibles inhibidoras de biofilms en dispositivos médicos recubiertos. Las nanopartículas de plata fueron sintetizadas por reducción de plata. La funcionalización con ceftriaxona se realizó por intercambio de ligandos. Las nanopartículas de plata obtenidas fueron caracterizadas por DLS (“Dynamic Light Scattering”) y espectrofotometría UV-Vis.La síntesis y caracterización de las AgNPs y de las AgNPs:CRO resultó satisfactoria. Se obtuvieron nanopartículas con polidispersión nula o baja. Se logró funcionalizar las AgNPs con CRO y la concentración fue dependiente de la relación AgNPs:CRO utilizada. La función biológica fue diferente sobre los dos microorganismos. No se alcanzaron concentraciones inhibitorias para P. aeruginosa con ninguna de las NPs ensayadas. Se determinó la concentración inhibitoria mínima de todas las NPs para S. aureus y el efecto fue bacteriostático en todos los casos. Las concentraciones citotóxicas para P. aeruginosa fueron las más altas ensayadas con AgNPs, AgNPs:CRO 1:1, AgNPs:CRO 1:3 y CRO mientras que sobre S. aureus se encontró un amplio rango de concentraciones en las que todas las NPs resultaron citotóxicas. Ambas bacterias fueron significativamente afectadas en el ensayo de inhibición de la formación de biofilms en placas de microtitulación. Este resultado es prometedor teniendo en cuenta que se están buscando soluciones para disminuir la formación de éstos en dispositivos médicos. En ninguno de los ensayos realizados sobre P. aeruginosa y S. aureus se erradicó el biofilm, se encontraron condiciones en las que se reducen significativamente.
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    Obtención y caracterización de extractos de Stevia rebaudiana y Kombucha para el desarrollo de un ingrediente cosmético multifuncional
    (Universidad ORT Uruguay, 2023) Salvetto Caraballo, Cristian; Louge Argañaraz, Josefina; Umpiérrez Failache, Mariana; Machado Casini, Felipe Daniel; Tiscornia Roble, María Inés
    El siguiente trabajo de grado tiene como objetivo desarrollar nuevos ingredientes para formulaciones biocosméticas. Se diseñó una estrategia para la extracción de polifenoles y saponinas de stevia, así como el cultivo de kombucha. Se llevaron a cabo cuatro métodos de extracción, utilizando dos mezclas de solventes y dos condiciones de incubación. Los solventes utilizados fueron agua, glicerol y etanol, mientras que las condiciones de incubación variaron en su duración y la temperatura utilizada. Todos los métodos de extracción fueron eficaces, siendo el mejor el método que empleó agua, etanol y glicerol a una temperatura de 45 °C durante 4 horas. Se evaluó además el efecto de la sonicación de las muestras, no siendo beneficiosa la extracción de estas sustancias. Por otro lado, se realizaron cultivos de kombucha a partir de infusiones de té blanco y de té blanco con stevia. Se llevó a cabo una caracterización de las muestras obtenidas, realizando distintas técnicas, como test afrosimétrico, cuantificación de polifenoles, análisis del espectro de absorción UV-Vis y cuantificación de saponinas. Los resultados obtenidos posicionaron a las muestras de stevia extraída con agua, glicerol y etanol a 45 °C, y kombucha a partir de té blanco y stevia como las más prometedoras dado que son las más ricas en polifenoles y saponinas. Se analizó la capacidad bioactiva de las muestras cuantificando tanto la actividad antioxidante como antimicrobiana de las mismas. Todas las muestras presentaron actividad antioxidante, siendo esta mayor en las muestras de stevia. Por otra parte, las muestras no mostraron actividad antimicrobiana. Se realizó también la caracterización de la población microbiana del SCOBY mediante la secuenciación de regiones codificantes para ARNr 16s y regiones ITS, identificándose diez especies bacterianas y tres especies de levaduras. Los resultados muestran el gran potencial de estos compuestos para su uso en biocosmética y sientan las bases para futuras investigaciones en las que se trabaje con extractos botánicos.