Trabajos finales de carrera de grado

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https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/2713

Estos trabajos de fin de carrera son obras producidas por estudiantes, que se originan en los procesos formativos de la universidad.

Tienen propósitos culturales y educativos. No son productos comerciales y su difusión pública no está autorizada.

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Producción y caracterización de un complejo multifuncional para uso cosmético a partir de chenopodium quinoa, avena sativa y alendula officinalis
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Guichón Gutiérrez, Luciana; Rodao Rodriguez, Oriana María; Louge Argañaraz, Josefina; Umpiérrez Failache, Mariana; Jackson Carvalho, Erienne; Tiscornia Roble, María Inés
El siguiente trabajo final de carrera busca desarrollar un ingrediente cosmético en base a plantas que sea natural y tenga una producción sostenible y sustentable con el medio ambiente. Las plantas estudiadas, Avena sativa (avena), Chenopodium quinoa (quinoa) y Caléndula officinalis (caléndula) se destacan por su alto contenido en compuestos bioactivos, como polifenoles, saponinas, flavonoides, vitaminas y triterpenos. La estrategia para generar un ingrediente multifuncional enriquecido con las moléculas previamente mencionadas se basó en su extracción de las plantas avena, quinoa y caléndula. Se implementaron cuatro métodos de extracción usando diferentes combinaciones de solventes, como agua, glicerol y etanol, bajo diversas condiciones de incubación en términos de tiempo y temperatura. Las muestras obtenidas fueron sometidas a un análisis exhaustivo utilizando diversas técnicas, lo que permitió formular el ingrediente M1, compuesto por un 50% de extracto de caléndula, 30% de quinoa y 20% de avena. Se realizaron pruebas afrosimétricas para evaluar cualitativamente la presencia de saponinas, y mediante barridos espectrales se identificaron posibles moléculas bioactivas. En la cuantificación de saponinas se observó un resultado de 4,6 mg EE/mL. Además, se evaluó la capacidad emulsionante del extracto, observándose la formación de macroemulsiones. El análisis de la actividad antimicrobiana reveló eficacia contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Candida albicans. La cuantificación de polifenoles resultó en 140 mg EAG/mL, la actividad antioxidante fue de 280.000 μg EAA/mL y se liofilizó un 74% del extracto. También se realizaron ensayos de citotoxicidad en líneas celulares no tumorales y se evaluó el efecto fotoprotector del extracto frente a la exposición a UV, se determinó que al 1% no afecta la viabilidad celular y presenta efecto fotoprotector. El ensayo de zimograma mostró que el extracto no afecta la actividad de metaloproteasas. Los resultados obtenidos en este estudio no solo destacan el potencial de la avena, la quinoa y la caléndula como ingredientes claves en la formulación de biocosméticos sostenibles, sino que también abren nuevas vías para la creación de productos que promuevan la salud y el bienestar de manera natural, respaldados por una producción respetuosa con el medio ambiente.
Evolución dirigida para incrementar el potencial oncolítico de virus RNA
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Gandioli Iglesias, Juan Ignacio; Paz Rijo, Mercedes; Echeverría Chagas, Natalia Paola; Olivero Deibe, Natalia
El siguiente trabajo final de carrera es una investigación enfocada en la evolución dirigida del virus Mayaro (MAYV) para mejorar su potencial como virus oncolítico. Los virus oncolíticos (VOs) son capaces de replicarse en células tumorales y destruirlas, lo que los convierte en una prometedora herramienta en el tratamiento del cáncer. Sin embargo, su eficacia está limitada por diversos factores, entre ellos, la capacidad del sistema inmunológico de suprimir su replicación en células tumorales. La investigación se centra en superar una de las barreras principales para el uso de MAYV en la terapia oncolítica: la resistencia de ciertas células tumorales debido a la alta expresión de la proteína antiviral dedo de zinc (ZAP). Esta proteína reconoce y degrada el ARN viral uniéndose a regiones ricas en dinucleótidos CpG, inhibiendo la replicación de diversos virus, incluido MAYV. Este trabajo plantea mejorar la replicación del MAYV en células con alta expresión de ZAP mediante un proceso de evolución dirigida, donde el virus es adaptado a este entorno a través de múltiples pasajes en líneas celulares resistentes. A lo largo del estudio, se realizaron pasajes en dos tipos de líneas celulares: aquellas con alta expresión de ZAP y aquellas donde se había suprimido la expresión de esta proteína (ZAP KO). Los resultados indicaron que, a pesar de los intentos de adaptación , el virus no logró proliferar eficientemente en las células con alta expresión de ZAP, lo que sugiere que en el marco del diseño experimental basado en evolución dirigida en este trabajo, no se ha logrado superar esta barrera. Sin embargo, en las líneas celulares ZAP KO, se observó una producción sostenida de partículas virales infectivas, lo que implica que la presión evolutiva ejercida por ZAP es un factor determinante en la capacidad replicativa del virus.
Optimización de un modelo preclínico para estudio de daño agudo al sistema nervioso por consumo de sustancias psicoactivas
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Torres Gómez, Florencia; Olivera-Bravo, Silvia; Ibarburu Fernandez, Sofía; Jackson Carvalho, Erienne
La exposición prenatal al alcohol puede afectar hasta el 3% de los nacimientos y ocasionar secuelas irreparables en el neurodesarrollo. Sin embargo, los efectos directos del consumo materno de dosis únicas extremadamente altas de esta sustancia son menos estudiados y la evidencia existente es insuficiente para entender los mecanismos y evaluar alternativas terapéuticas. Para modelizar esta forma de consumo en ratas, se administraron 6 g/Kg de etanol entre los días 12 y 15 de gestación para afectar la neurogénesis y la gliogénesis embrionaria. Para ello, las ratas preñadas dispusieron a voluntad de alcohol 20% (en agua endulzada al 5%) como única forma de hidratación durante ese periodo. El mismo número de hembras controles recibió agua endulzada al 5% durante el mismo período, mientras que las del grupo control absoluto bebieron agua sin ningún aditivo. Las crías se procesaron al momento del nacimiento, a los 3, 15 y 30 días para analizar la reactividad glial, y marcadores y efectores de inflamación mediante inmunomarcado, qPCR y zimografía en gel a lo largo de las primeras etapas del desarrollo. Los resultados obtenidos parecen reproducir algunos de los efectos negativos del alcoholismo materno sobre el sistema nervioso central de las crías, los que se mantienen aun 30 días después del nacimiento. Por lo tanto, el abordaje propuesto es útil para evaluar los efectos del alcoholismo materno agudo sobre el neurodesarrollo y probablemente para estudiar los efectos del consumo combinado de otras sustancias psicoactivas o evaluar posibles alternativas terapéuticas. Como perspectivas se propone optimizar otras alternativas de administración para lograr datos menos dispersos, realizar un seguimiento de los animales disgregados por sexo para evaluar posibles dimorfismos sexuales y correlacionar los parámetros analizados en este estudio longitudinal con posible daño neuronal y desempeño cognitivo y funcional durante el neurodesarrollo.
Evaluación de las propiedades antivirales e inmunomoduladoras de péptidos sintéticos derivados de la proteína signal-regulatory protein alpha (SIRPA)
(Universidad ORT Uruguay, 2024) Garcia Urrutia, Maria Paz; Sarute Leites, Nicolás Gerardo; Bengochea Olveira, Virginia Valeria; Ramas Guerra, Viviana Andrea
En el presente trabajo final de carrera se analiza la actividad antiviral de la glicoproteína SIRPA frente a un virus de importancia para la salud pública perteneciente a las familias Flaviviridae y Arenaviridae y su posible rol en la señalización inmune frente a estas infecciones. Con este fin, se examinan niveles de infección y la respuesta inmune innata en la línea celular humana A549 y en macrófagos primarios de ratón utilizando a los virus Zika y Dengue y el virus Junín como modelos de flavivirus y arenavirus, respectivamente, y moléculas agonistas sintéticas de receptores de reconocimiento de patrones (PRRs) en células SIRPA knockdown. Mediante esta estrategia, se establece que SIRPA es un factor antiviral contra los flavivirus ZIKV, DENV y JUNV-C1, pero su contribución a la regulación de la respuesta innata difiere según la vía de señalización inmune activada. Debido a la actividad preponderante de SIRPA en el contexto de infección viral, también se diseñó y sintetizó péptidos miméticos representativos de su dominio citoplasmático, para evaluar su potencial antiviral e inmunomodulatorio. Esta es una estrategia terapéutica con gran potencial, debido al fácil diseño y síntesis de los péptidos, bajos costos de producción y especificidad de acción. En este trabajo, se evalúa un péptido representativo del ITIM-1 de SIRPA, demostrando que aquellas células tratadas con este péptido mostraron niveles de infección viral menores que células control, aunque su actividad no reguló la señalización inmune evaluada durante la infección. Se concluye que este trabajo aporta información novedosa acerca de la biología de SIRPA en el contexto de infección viral, así como su potencial utilidad en el desarrollo de biofármacos antivirales.
Empleo de técnicas histológicas para la caracterización de TMEM176B como modulador inmunológico en la Encefalomielitis Autoinmune Experimental (EAE) y potencial target farmacológico
(Universidad ORT Uruguay, 2024) D'Anatro Pintos, Antonella; Olivera De Luca, Daniela; Pittini Perez, Álvaro Gustavo; Ibarburu Fernandez, Sofía
El presente trabajo final de carrera tiene como objetivo aportar conocimiento sobre el rol de Tmem176b (Transmembrane protein 176b) en el desarrollo de la enfermedad Esclerosis múltiple (EM), mediante estudios histológicos y de inmunofluorescencia en el modelo murino de EM, Encefalitis Autoinmune Experimental (EAE). Durante este trabajo se hizo un enfoque particular sobre el rol de la microglía, siendo una célula de la inmunidad innata central para el desarrollo de la enfermedad. A la vez, busca posicionar a Tmem176b como una molécula farmacológicamente modulable por la lectina Galectina-1. Primero, se puso a punto una técnica de inmunofluorescencia que permitió comprobar la presencia de Tmem176b en la microglía, y su tendencia a disminuir frente a un estímulo inflamatorio. Luego, se demostró que la EAE promueve la microgliosis, siendo más exacerbada en ratones Tmem176b-/-, mientras que en ratones Tmem176b-/-Casp1-/- este efecto se revertía. La Caspasa-1 activa es un producto proinflamatorio de la activación del inflamasoma NLRP3, el cual puede ser inhibido por Tmem176b. Para indagar más sobre los efectos de la expresión de Caspasa-1 activa en la microglía, se buscó poner a punto un marcado, el cual resultó inespecífico tras varios intentos. Posteriormente, se refinó la técnica Luxol Fast Blue para el estudio histopatológico de muestras lumbares de ratones WT, Tmem176b-/- y Tmem176b-/-Casp1-/-, donde se observa una tendencia a una mayor desmielinización en ausencia de Tmem176b. Por último, en búsqueda de caracterizar a Tmem176b como un blanco modulable por Galectina-1, se comprueba que su administración promovía un curso más leve de la enfermedad de forma Tmem176b-dependiente, pero los mecanismos por los que ocurre este efecto requieren un estudio a mayor profundidad.

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