Browsing by Author "Campos Perelló, Lucía"
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- ItemAdaptación del proceso de cultivo del virus rábico en células BHK con medio libre de suero(Universidad ORT Uruguay, 2020) Borgiani Quintana, Agustin Pablo; Campos Perelló, Lucía; Mastropietro García, Giuliana Paula.; Fiestas Puppo, María Lucía; Tiscornia Roble, María InésEl presente trabajo tiene como fin optimizar el cultivo viral de rabia, adaptando el proceso actual de producción que realiza la empresa Virbac Uruguay S.A. Se busca reducir el tiempo total del proceso y sumar ventajas de calidad antigénica. En este contexto se plantea la obtención de un cultivo viral del virus de la rabia, cultivado con células BHK en suspensión en crecimiento con medio libre de suero. El rendimiento de los bancos generados fue evaluado mediante una curva de crecimiento, observando que las células adaptadas en medio CD BHK-21 lograron un desarrollo cuatro veces superior al medio tradicional. Se diseñaron procesos de cultivo viral en escala de laboratorio, piloto e industrial, siguiendo procedimientos de la empresa. El proceso diseñado en escala piloto fue realizado con éxito. Según el análisis económico se determinó que el cambio de medio es rentable para la empresa, al disminuir el lead time y aumentar la cantidad de lotes. A esto se suma el valor agregado de la reducción de tiempo y riesgos de introducción de contaminantes.
- ItemCaracterización analítica de las toxinas de Bacillus anthracis cepa Sterne 34F2(Universidad ORT Uruguay, 2015) Campos Perelló, Lucía; Pastor Armendariz, María Eugenia; Betancor Dutrenit, Lorena; Sanguinetti Acosta, Carlos Julio; Martínez Núñez, Guadalupe Alejandra; Estefanell Ucha, BorjaEl trabajo tiene como objetivo general el análisis e identificación del antígeno protector (PA) de 83kDa, el factor letal (LF) de 90kDa y el factor de edema (EF) de 89kDa, del sobrenadante de la fermentación de Bacillus anthracis cepa Sterne 34F2, de acuerdo a lo solicitado por la empresa Bio High Tec Laboratories. Para esto se ensayaron diferentes condiciones de fermentación a escala de laboratorio y se comparó la composición proteica con una fermentación a escala piloto. Las tres proteínas (PA, EF y LF) se analizaron mediante técnicas de cuantificación de proteínas, electroforesis y Western blot. También se estudió la estabilidad de las proteínas de interés a distintas condiciones de almacenamiento, con el fin de optimizar los costos de logística y de distribución. En la fermentación a escala de laboratorio, se obtuvo mayor expresión de proteínas totales a 37°C, por 24 hs con agitación de 80 rpm y en ausencia de CO2. Por SDS-PAGE se observaron proteínas correspondientes a los pesos moleculares esperados de 83 kDa para PA, 89 kDa para EF y 90 kDa para LF. Se detectó mediante Western blot degradación de las proteínas en la fermentación a escala de laboratorio. Los ensayos de estabilidad arrojaron diferencias entre la fermentación a escala de laboratorio y a escala piloto, observándose que para esta última el uso de glicerol retrasa o evita la degradación de las proteínas almacenadas a temperatura ambiente. Para lograr una mejor caracterización de los componentes de las toxinas se deben utilizar mayor número de ensayos utilizando diferentes metodologías que permitan conocer mejor el contenido presente en el sobrenadante de la fermentación de Bacillus anthracis, cuya finalidad es, ser el principio activo de una vacuna de uso humano contra el ántrax.
- ItemGeneración de una estrategia para la detección de virus adventicios en bancos celulares de producción de vacunas veterinarias(Universidad ORT Uruguay, 2016) Campos Perelló, Lucía; Acuña Gonzalez, Patricia Nieves; Negro Larrama, Cecilia Beatriz; Alonso, Pablo; Tucci Pi, Paula IsabelEste trabajo tuvo como objetivo generar y demostrar la efectividad de una estrategia para la detección de virus adventicios en bancos celulares utilizados en la producción de vacunas veterinarias en Virbac Uruguay. Para esto se analizó la normativa internacional referente a la detección de virus adventicios. Luego del análisis se seleccionó y adecuó el ensayo a las condiciones de Virbac Uruguay. A su vez, a modo de prueba de la estrategia generada, se evaluó contaminación con virus adventicios en cuatro bancos celulares mediante la evaluación de origen de las materias primas, generación de bancos de trabajo, titulación por TCID50 para la generación de controles positivos, generación de controles negativos y ensayos de inmunofluorescencia para la detección viral. En base a los resultados, se generó un procedimiento operativo estandarizado con su registro asociado, para ser utilizado en el análisis de cualquier tipo de banco celular de la empresa y resultando ser viable económicamente para aplicar como mecanismo de control.
- ItemMejoras en el proceso de producción de antígeno de virus de la rabia(Universidad ORT Uruguay, 2022) Carballo Mariño, Julieta; Grötiuz Scarella, Adolfo German; Campos Perelló, Lucía; Acuña Gonzalez, Patricia Nieves; Blanc Pintos, Andrea MaríaEl siguiente trabajo final de carrera tiene como objetivo establecer mejoras en el proceso de producción del antígeno rábico. Virbac Uruguay es un laboratorio de producción de vacunas y fármacos de uso animal que produce vacunas de rabia principalmente para uso en perros, gatos y bovinos. Debido al aumento creciente de la demanda es necesario mejorar los rendimientos productivos. Se realizó el “scale-down” del proceso productivo en un biorreactor de pruebas de 15 L. Se generó un Banco de Trabajo Viral para realizar pruebas a futuro en el biorreactor de pruebas, obteniendo un título viral similar superior a la media de títulos de 2020 en producción industrial. Se estableció un sistema de perfusión discontinua con el que se alcanzó una concentración celular de 6E6 células/mL; máximo histórico de crecimiento celular. Se evaluaron diversos procesamientos "downstream" en escala laboratorio. Se seleccionó una cascada clarificante consistente en la centrifugación del antígeno por 15 minutos a 1300 rpm y como único paso de microfiltración un filtro EAV o Preflow; con una pérdida de antígeno en promedio inferior al 21%. Se seleccionó un proceso de ultrafiltración con factor de concentración volumétrico 10X, con una pérdida promedio de 23% de antígeno viral. y un proceso de diafiltración con 10 volúmenes de diafiltrado agregados de 2 en 2, utilizando solución estabilizadora como "buffer" diafiltrante. Se considera que la implementación de estas mejoras, aplicadas tanto en el contexto de pruebas como a futuro en producción, permitirán un mayor rendimiento del antígeno de virus de la rabia producido en las instalaciones de Virbac Uruguay.