Producción recombinante de toxina botulínica

Abstract

Las infecciones clostridiales, son enfermedades tóxico-infecciosas, producidas por bacterias del género Clostridium, que se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Una de las potentes enfermedades clostridiales que se conocen es el Botulismo. Este genera riesgos económicos para los productores nacionales ya que afecta a los bovinos, ovinos y equinos. Hay siete serotipos de BoNT (Neurotoxina botulínica) identificados, que se denominan de la A a la G. En Uruguay, la industria de la producción de vacunas veterinarias se desarrolla desde 1950, las principales vacunas producidas son contra clostridiosis y ántrax por lo que se busca mejorar las tecnologías utilizadas y el rendimiento de producción. La producción de proteínas recombinantes en microorganismos como E. coli, es una forma robusta de producción, ya que su manipulación genética es sencilla y se encuentra muy bien descrita bibliográficamente. El presente trabajo propone desarrollar un proceso simple, seguro y eficiente de expresión recombinante del fragmento Hc de BoNT/C en E. coli, con el fin de sortear los inconvenientes planteados de la producción de BoNT/C como antígeno para la fabricación de vacunas veterinarias contra el botulismo. Se obtienen: las construcciones del plásmido pBAD/His A, con el gen bont/HcC en sus dos variables dependiendo de las estrategias propuestas; el estudio de la expresión en la cepa BL21 (DE3) de E. coli, dependiendo de la construcción que contiene y de la mejor concentración de inductor para la expresión. Se determina también cual de las estrategias planteadas fue la efectiva. Se logra estudiar el comportamiento de las células ante la presencia/ ausencia del L- Arabinosa, útil para la optimización de los tiempos de producción. El desarrollo es simple, seguro y eficiente de expresión de Hc recombinante, pero se considera que el proyecto no pudo concluir en este aspecto, pero si otorga un avance.