Generación de líneas transgénicas de pez cebra como herramienta para el estudio del tejido adiposo blanco

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Date
2019
Authors
Levin Ferreyra, Florencia
Publisher
Universidad ORT Uruguay
DOI
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Abstract
La obesidad es una enfermedad que se desarrolla cuando el consumo de energía excede el gasto de la misma, resultando en el aumento de reservas de energía en forma de triacilglicéridos (TAGs) dentro del tejido adiposo (TA). Se ha postulado que la asociación entre la obesidad y el desarrollo de enfermedades metabólicas está relacionada a factores genéticos y ambientales, cuya interacción genera alteraciones en la capacidad proliferativa del tejido adiposo y el desarrollo de inflamación. Para el estudio de la interrelación de estos factores se necesita el desarrollo de un modelo animal que facilite la investigación a nivel celular y molecular de la adiposidad regional in vivo. Las características del modelo de pez cebra son especialmente adecuadas para satisfacer estas necesidades. Posee un alto nivel de conservación a nivel de vías metabólicas y genes con el humano, además de que el TA es morfológica y funcionalmente homólogo al TA blanco de mamíferos. En este trabajo se propuso la generación de una línea transgénica de pez cebra reportera de TA. Se generaron construcciones de transgénesis utilizando el kit Tol2 en las que la expresión de EGFP era regulada por regiones promotoras de genes de expresión conocida en adipocitos. Los genes elegidos fueron: pparγ, fabp11a, c/ebpα, adipoqb y cfd. Luego de clonar y generar las construcciones de transgénesis, se inyectaron embriones de pez cebra y observándose el patrón de expresión de EGFP durante distintas etapas de su desarrollo. Se hizo una puesta a punto de los protocolos de criopreservación e inmunofluorescencia in toto y en criocortes con el fin de caracterizar en mayor profundidad los patrones de expresión de las líneas. Durante el análisis de los embriones y larvas de la primera y segunda generación, tanto in vivo como mediante cortes, se observó señal del reportero en diferentes tejidos confirmando la obtención de animales transgénicos. No se pudo detectar señal proveniente del TA. Esto indica que será necesario mejorar la definición de las regiones a utilizar como promotoras, o buscar otros factores que permitan la expresión restringida del reportero en el TA.
En
Thesis note
Trabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Ingeniera en Biotecnología
144 p. diagrs., fot., tbls., grafs
Notes
Incluye bibliografía.
Subject
PROYECTOS-BI, PEZ CEBRA, TEJIDO ADIPOSO, OBESIDAD
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Levin Ferreyra, F. (2019). Generación de líneas transgénicas de pez cebra como herramienta para el estudio del tejido adiposo blanco (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/4009
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