Repositorio Académico Digital - Universidad ORT Uruguay

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Recent Submissions

Generación de una plataforma para la producción de proteínas recombinantes en Chlamydomonas reinhardtii
(Universidad ORT Uruguay, 2026) Martínez Carlis, Marcia; Klett Cabrera, Matilde; Toniotti García, Fiorella; Rocha Calvette, Facundo Serafín; Umpiérrez Failache, Mariana; Nervi Faggiani, Eliana; Mulet Navarro, Ana Paula
La producción de proteínas recombinantes (PRs) constituye una herramienta fundamental en los sectores biomédico, industrial y biotecnológico. Sin embargo, los sistemas de expresión convencionales presentan limitaciones asociadas a costos elevados, dificultades de escalado y restricciones para la producción de proteínas complejas. En este contexto, las microalgas han surgido como una alternativa prometedora debido a su capacidad para sintetizar proteínas de alta calidad con modificaciones postraduccionales similares a las humanas y a menores costos de producción. Aún existen desafíos relacionados con la obtención de transformantes estables y los bajos niveles de expresión. El presente proyecto tuvo como objetivo desarrollar una plataforma de producción de proteínas recombinantes en Chlamydomonas reinhardtii, evaluando su potencial como sistema alternativo para aplicaciones biotecnológicas. Como etapa preliminar, se expresó, purificó y caracterizó la proteína recombinante MMP-8 humana y murina en Escherichia coli BL21, optimizando las condiciones para su obtención en forma soluble, desarrollando un protocolo de purificación por IMAC y confirmando su identidad y actividad enzimática mediante espectrometría de masas. Posteriormente, se diseñaron y construyeron vectores recombinantes mediante ensamblaje Golden Gate para expresar un VHH con potencial aplicación cosmética dirigido contra MMP-8. Los constructos fueron validados en E. coli y Agrobacterium tumefaciens, confirmando su estabilidad e integridad. Además, se optimizó la producción de autolisina para facilitar la remoción de la pared celular de la microalga. Aunque no se obtuvieron transformantes mediante A. tumefaciens ni se detectó expresión del VHH, se logró la expresión del reportero mCherry y la obtención de transformantes por electroporación. Los resultados aportan herramientas para la ingeniería genética de microalgas y fortalecen el desarrollo de C. reinhardtii como plataforma para la producción de proteínas recombinantes.
Biocontrol de Calonectria asociada a pudrición radicular en Eucalyptus mediante cepas de Trichoderma
(Universidad ORT Uruguay, 2026) García Sainz-Rasines, Sara; Villar Peculio, Héctor Andrés; Oberti Rivarola, Héctor Luis; Sessa Jusid, Lucía Olga; Simeto Ferrari, Sofia
La producción de Eucalyptus constituye uno de los pilares del sector forestal uruguayo, aunque su desarrollo se ve afectado por enfermedades radiculares causadas por hongos del género Calonectria. Entre ellas, la pudrición radicular representa una de las principales amenazas para la producción de plantas en vivero. Diversos estudios han señalado el potencial de microorganismos antagonistas como alternativa sostenible para el control de estos patógenos. En este contexto, el presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la capacidad de cepas de Trichoderma spp. para controlar la pudrición radicular causada por Calonectria spp. en Eucalyptus dunnii bajo condiciones de invernáculo. Inicialmente, se caracterizó la patogenicidad de 15 aislamientos de Calonectria spp. procedentes de viveros y campos forestales de Uruguay. Los ensayos revelaron diferencias significativas en la agresividad de los aislados, alcanzando los más virulentos niveles de mortalidad cercanos al 40%. Asimismo, mediante análisis filogenéticos basados en cuatro marcadores génicos, se identificaron aislamientos pertenecientes a Calonectria pauciramosa y otros agrupados dentro del complejo Calonectria cylindrospora. Posteriormente, se seleccionó uno de los aislados más agresivos para evaluar el efecto biocontrolador de tres cepas de Trichoderma spp. Los resultados mostraron una reducción significativa de la incidencia de la enfermedad, con disminuciones de mortalidad de hasta un 82%, además de observarse efectos favorables sobre el crecimiento vegetal. Finalmente, el análisis genómico de una cepa promisoria de Trichoderma asperelloides permitió identificar genes vinculados a mecanismos de biocontrol, incluyendo enzimas CAZymes y clústeres biosintéticos de metabolitos secundarios antifúngicos. En conjunto, los resultados respaldan el uso de Trichoderma spp. como una herramienta eficaz para el manejo integrado de la pudrición radicular en viveros forestales.
Estudio y caracterización de enzimas lacasas y su interacción con nanomateriales para aplicaciones biotecnológicas
(Universidad ORT Uruguay, 2026) Filippini Negri, Rodrigo Diego; Betancor Dutrenit, Lorena; Jackson Carvalho, Erienne; Umpiérrez Failache, Mariana; Ripoll Pérez, Magdalena
Las enzimas son herramientas biotecnológicas de gran interés debido a su elevada especificidad y eficiencia catalítica, lo que las convierte en candidatas atractivas para aplicaciones industriales, ambientales y analíticas. En este contexto, las lacasas destacan por su capacidad de oxidar diversos compuestos utilizando oxígeno molecular como aceptor final de electrones. El presente proyecto tuvo como objetivo desarrollar un sistema recombinante para la expresión heteróloga de la small laccase de Streptomyces coelicolor (scSLAC) en Escherichia coli y evaluar su potencial biotecnológico en comparación con una lacasa comercial de Trametes versicolor (tvLAC). Para ello, se construyó un plásmido basado en pET-28a(+), se expresó la enzima recombinante en la cepa BL21-CodonPlus (DE3)-RP de E. coli y se purificó mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados. La actividad enzimática fue evaluada utilizando ABTS como sustrato, y se estudió la inmovilización de scSLAC sobre nanopartículas de sílica biomimética y sulfuro de cobre (CuS), además de su estabilidad frente a diferentes condiciones de pH, temperatura y concentraciones de Cu²⁺. La purificación permitió obtener una enzima activa con un rendimiento global del 76 % y un factor de purificación de 1223. La inmovilización covalente sobre sílica biomimética activada mostró los mejores resultados, alcanzando un 94,4 % de inmovilización y un rendimiento del 107,8 %. Asimismo, se observó que la actividad de scSLAC depende de la relación enzima/Cu²⁺, evidenciando fenómenos de activación e inhibición. Finalmente, los ensayos de degradación de tetraciclina demostraron el potencial de estas lacasas para aplicaciones en biorremediación y procesos biotecnológicos, aunque se requieren estudios adicionales para optimizar su desempeño y comprender mejor su comportamiento catalítico.
Optimización de un sistema de degradación selectivo de transcriptos en Trypanosoma cruzi
(Universidad ORT Uruguay, 2026) Fedele Cabral, Carolina Patricia; Díaz Viraque, Florencia; Chiribao Pombo, María Laura; Francia Viña, María Eugenia; Paes Vieira, Lisvane
El siguiente proyecto aborda una de las principales limitaciones en el estudio de la enfermedad de Chagas, causada por el protozoario Trypanosoma cruzi, una patología que continúa representando un importante problema de salud pública en América Latina. A pesar de los avances en el conocimiento de la biología del parásito, numerosos genes involucrados en su ciclo de vida, patogenicidad y persistencia en el hospedero permanecen sin caracterizar debido a la escasez de herramientas moleculares adecuadas para analizar su función. Esta dificultad se ve agravada por la ausencia de la maquinaria de ARN interferente en T. cruzi, lo que impide la aplicación de estrategias convencionales de silenciamiento génico. Con el objetivo de superar esta limitación, se optimizó un sistema de degradación selectiva de transcriptos basado en la tecnología SHARK, combinado con la herramienta de edición génica CRISPR/Cas9. El sistema SHARK utiliza aptazimas capaces de reconocer ligandos exógenos específicos; la interacción con estos compuestos desencadena la degradación del ARN mensajero blanco, permitiendo regular la expresión génica a nivel postranscripcional. Para ello, se generaron líneas de parásitos genéticamente modificadas que incorporan el cassette SHARK y se determinaron las condiciones necesarias para su correcta inducción y funcionamiento. Los resultados obtenidos demostraron que esta tecnología constituye una herramienta eficaz para inducir la degradación selectiva de transcriptos en T. cruzi, logrando reducciones de entre 46 % y 88 % en los niveles de ARNm, acompañadas por una disminución de la expresión proteica. Estos hallazgos validan el potencial de SHARK como estrategia de knockdown génico, facilitando el estudio funcional de genes esenciales y contribuyendo al desarrollo de nuevas aproximaciones para la investigación de este relevante parásito.
Estudio exploratorio del microbioma intestinal de individuos con HHT en Uruguay
(Universidad ORT Uruguay, 2026) Díaz Pagola, Mariano; Olivero Deibe, Natalia; Carrión Runco, Federico Daniel; Carolina Ortiz Carrión, Cecilia; Bengochea Olveira, Virginia Valeria
El siguiente proyecto aborda el estudio de la Telangiectasia Hemorrágica Hereditaria (HHT), una enfermedad vascular rara de herencia autosómica dominante caracterizada por malformaciones arteriovenosas y episodios recurrentes de sangrado gastrointestinal. Aunque existe evidencia creciente que relaciona la disbiosis intestinal con alteraciones vasculares a través del eje microbiota-intestino-vaso, hasta el momento no se había realizado una caracterización del microbioma intestinal en pacientes con esta patología. El objetivo principal fue efectuar la primera descripción exploratoria de la microbiota intestinal en individuos con HHT mediante secuenciación de longitud completa del gen ARNr 16S (regiones V1–V9) utilizando tecnología Oxford Nanopore. Para ello, se evaluaron parámetros de diversidad microbiana, composición taxonómica y potencial funcional predictivo, comparándolos con un grupo de controles sanos. Se desarrolló un estudio piloto observacional, transversal y exploratorio que incluyó 10 pacientes con diagnóstico clínico y/o genético de HHT y 3 individuos sanos. El análisis bioinformático se realizó mediante el pipeline Porefile/SILVA y la plataforma EZBioCloud, incorporando análisis de diversidad alfa y beta, abundancia diferencial y predicción funcional. Si bien no se detectaron diferencias estadísticamente significativas tras la corrección por comparaciones múltiples, se observaron tendencias consistentes hacia una menor diversidad alfa, una mayor heterogeneidad interindividual y un incremento en la relación Firmicutes/Bacteroidetes en los pacientes con HHT. Asimismo, el análisis funcional predictivo sugirió posibles diferencias en rutas metabólicas vinculadas a la degradación de glicanos, transporte ABC y metabolismo de tiamina. En conjunto, este trabajo establece una línea de base para el estudio del microbioma intestinal en HHT y sienta las bases para futuras investigaciones con mayor tamaño muestral y enfoques multi-ómicos.