Browsing by Author "Fontes Cunha, Mariel Andrea"

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    Implementación de mutagénesis en un solo paso y rescate genético en Escherichia coli para la dilucidación de la biosíntesis de la ubiquinona
    (Universidad ORT Uruguay, 2023) Fontes Cunha, Mariel Andrea; Salinas Grecco, Marcos Gustavo; Manta Porteiro, Bruno; Pórfido, Jorge Luis; Mulet Navarro, Ana Paula
    La ubiquinona (UQ) o coenzima Q es un lípido esencial de las membranas que desempeña un papel central en la cadena de transporte de electrones en todos los seres vivos, debido a que es móvil y capaz de aceptar y ceder electrones. Aunque la biosíntesis de UQ está bien comprendida en procariotas, aún persisten incógnitas en la de eucariotas, particularmente en los pasos de descarboxilación e hidroxilación del carbono 1 del anillo de benzoquinona. Estos procesos son llevados a cabo por las enzimas UbiD y UbiH en Escherichia coli, lo que hace que esta sea un modelo para investigar y evaluar las funciones de genes candidatos eucariotas. La UQ es de vital importancia y sus deficiencias, en especial las relacionadas con irregularidades en la vía de biosíntesis (deficiencias primarias), pueden desencadenar enfermedades mitocondriales graves que pueden resultar en la muerte temprana del paciente o afectar a órganos con altos requerimientos energéticos. Además, la gravedad y la duración de los síntomas pueden variar considerablemente entre las personas afectadas y la mayoría de los casos clínicos notificados carecen de un diagnóstico molecular que identifique la mutación genética subyacente, lo que resalta la necesidad de investigar la biosíntesis de UQ. El siguiente trabajo de grado propone una puesta a punto de una herramienta de cribado para identificar cepas bacterianas con deficiencias en la biosíntesis de UQ. Se estandarizó un protocolo de mutagénesis dirigida en Escherichia coli para crear cepas mutantes en genes responsables de la biosíntesis (en particular se generó una cepa mutante en ubiD) y se realizó la puesta a punto de la técnica de rescate fenotípico (funcional) homólogo al clonar un gen nativo de interés (ubiH) en plásmidos de expresión para transformar cepas mutantes en dicho gen. Estas herramientas son vitales para futuros estudios de genes eucariotas y su función en la biosíntesis de UQ a través de la observación del rescate funcional heterólogo.