Repositorio Académico Digital - Universidad ORT Uruguay

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Recent Submissions

Evaluación del efecto de los compuestos volátiles en la inoculación de cultivos mixtos con H. vineae y S. cerevisiae en la producción de vinos de calidad
(Universidad ORT Uruguay, 2025) Collins Salvatierra, Natacha; Valera Martínez, María José; Balseiro Herrera, María Luciana; Machado Casini, Felipe Daniel
El uso predominante de Saccharomyces cerevisiae en vinificación ha generado vinos sensorialmente estandarizados, ya que las distintas cepas producen perfiles aromáticos similares. Para diversificar estos productos, la industria ha incorporado cultivos mixtos que combinan levaduras no-Saccharomyces, responsables de aromas distintivos, con S. cerevisiae, encargada de completar la fermentación. Esta estrategia es especialmente relevante en variedades neutras como Ugni blanc, cuyo bajo aporte aromático hace necesario potenciar su valor mediante perfiles sensoriales diferenciados. Comprender la comunicación entre levaduras a través del quorum sensing permite optimizar los tiempos de inoculación y maximizar la cooperación entre especies. En este trabajo final de carrera se fermentó un símil mosto con Hanseniaspora vineae M12/196F y se identificaron por GC-MS los compuestos volátiles producidos durante las primeras 72 horas. Se seleccionaron aquellos con posible rol en quorum sensing y se evaluó su efecto, en concentraciones fisiológicas, sobre el crecimiento de siete cepas de H. vineae y siete de S. cerevisiae mediante lector de placas. Se observó que el acetato de 2-feniletilo y el triptofol, detectados a las 24 horas, favorecieron el crecimiento de S. cerevisiae, mientras que el ácido hexanoico, producido a las 48 horas, lo inhibió. Fermentaciones posteriores con S. cerevisiae TS28 revelaron que el ácido hexanoico aumentó la eficiencia fermentativa al actuar como factor de estrés. Finalmente, se realizaron cultivos mixtos con co-inoculaciones e inoculaciones secuenciales. Los análisis celulares, aromáticos y fisicoquímicos mostraron que inocular S. cerevisiae TS28 a las 24 horas de fermentación de H. vineae M12/196F produjo el mejor equilibrio entre eficiencia fermentativa, ausencia de defectos y generación de aromas florales, frutales, mantecosos y especiados, un perfil altamente valorado en vinos blancos y tintos jóvenes.
Optimización de un modelo celular para la evaluación de diferencias sexo-específicas en condiciones normales y de daño al sistema nervioso central
(Universidad ORT Uruguay, 2025) Cabrera Vila, Matilde; Rosselló Zapata, Valentina; Olivera Bravo, Silvia Ethel; Louge Argañaraz, Josefina; Ibarburu Fernandez, Sofía
Las enfermedades neurodegenerativas se caracterizan por la pérdida progresiva e irreversible de poblaciones neuronales específicas y presentan claras diferencias sexo-específicas en incidencia, prevalencia y evolución. Sin embargo, la mayoría de los modelos experimentales no incorporan el sexo como una variable, lo que limita el diseño de terapias eficaces. Este trabajo se centra en optimizar modelos celulares que permitan identificar diferencias sexo-específicas tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. Para este trabajo final de carrera se utilizaron cultivos primarios de astrocitos corticales y medulares de ratas neonatas machos y hembras wild-type (WT), así como de ratas SOD1G93A, un modelo preclínico de esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Se evaluaron viabilidad celular, funcionalidad mitocondrial y niveles de glutatión mediante técnicas bioquímicas, inmunocitoquímica y microscopía, bajo condiciones basales y tras inducción de estrés oxidativo con H₂O₂ y/o D-galactosa, con o sin daño mecánico. Además, se realizaron co-cultivos preliminares de astrocitos aberrantes de animales SOD1G93A con motoneuronas NSC-34 para analizar su impacto en la supervivencia neuronal. Los resultados mostraron que los astrocitos corticales WT de ratas hembra presentaron mayor viabilidad basal, mejor tolerancia a H₂O₂ hasta 50 mM, mayor resistencia a galactosa 10 mM y mejor respuesta al daño mecánico. En contraste, los astrocitos medulares WT de hembras fueron más vulnerables al estrés oxidativo y mostraron menor glutatión y potencial mitocondrial. En el modelo SOD1G93A, las hembras exhibieron menor viabilidad basal y menores niveles de glutatión y potencial mitocondrial, aunque respondieron mejor al daño mecánico. Estos hallazgos respaldan el uso de astrocitos WT y SOD1G93A como modelos adecuados para estudiar respuestas sexo-específicas ante daño oxidativo y mecánico, y sugieren profundizar su optimización para evaluar neuroprotectores y moduladores de la reactividad astrocitaria.
Optimización de herramientas biotecnológicas de detección de biomarcadores de salud intestinal en TEA
(Universidad ORT Uruguay, 2025) Irastorza Sasson, Maite; Riera Faraone, Nadia Sofía; Megrian Nuñez, Daniela; Perbolianachis Duarte, Paula
El microbioma intestinal ha adquirido creciente relevancia en el estudio de enfermedades neurológicas, incluido el trastorno del espectro autista (TEA). Este conjunto de afecciones neuroconductuales resulta de la interacción entre factores genéticos y ambientales. La alta prevalencia de síntomas gastrointestinales en personas con TEA ha impulsado la investigación sobre el posible papel de la microbiota intestinal en su desarrollo. La microbiota humana, compuesta por aproximadamente 10¹⁴ microorganismos -bacterias, virus, hongos y arqueas-, contribuye al metabolismo, a la homeostasis inmunológica y a la regulación del sistema nervioso central (SNC) mediante rutas neuronales, inmunes y endocrinas. Los microorganismos producen metabolitos, como ácidos grasos de cadena corta, que pueden alterar funciones gastrointestinales y neurológicas, interfiriendo en la señalización de neurotransmisores y en mecanismos de comunicación celular. El avance en herramientas de detección de biomarcadores microbianos resulta fundamental para comprender su influencia en la salud. Métodos como la qPCR y la secuenciación completa del gen 16S mediante tecnología Oxford Nanopore (ONT) permiten un análisis detallado del perfil bacteriano, favoreciendo el desarrollo de estrategias diagnósticas y terapéuticas innovadoras. Esta investigación se enfocó en optimizar herramientas de qPCR para detectar biomarcadores asociados a la salud intestinal en niños con TEA, evaluando distintos primers dirigidos a filos y géneros específicos, además de probar dos estrategias de normalización mediante curvas de calibración. Paralelamente, se realizó una caracterización taxonómica por secuenciación 16S de la microbiota de niños con TEA y sus hermanos neurotípicos. Se observaron bacterias más abundantes en TEA, como Clostridium perfringens y Paeniclostridium sordellii, y otras más predominantes en controles, como Blautia phocaeensis y Roseburia inulinivorans. Además, se complementó el análisis con cultivo anaeróbico para aislar bacterias de interés y emplearlas como referencia en el desarrollo de métodos diagnósticos.
Desarrollo de herramientas moleculares en Gluconobacter
(Universidad ORT Uruguay, 2025) Machado da Silva Basso, Manuela; Strauch Bartol, María Mercedes; Mulet Navarro, Ana Paula; Ripoll Pérez, Magdalena; Ortiz Carrión, Cecilia Carolina; Soriano Ávila, Nicolás
Las bacterias del género Gluconobacter poseen una destacada capacidad oxidativa mediada por deshidrogenasas periplásmicas, lo que las convierte en microorganismos de interés industrial para la obtención de compuestos como dihidroxiacetona (DHA), ácido glicérico (GA) y L-sorbosa. Entre ellas, Gluconobacter oxydans NBRC14819 (Gox) y Gluconobacter frateurii NBRC103465 (Gfr) se han estudiado ampliamente por su eficiencia en la conversión de glicerol, posicionándose como plataformas biotecnológicas valiosas. Sin embargo, el desarrollo de herramientas genéticas para estas especies continúa siendo limitado debido a que no son organismos modelo consolidados. Este trabajo tuvo como objetivo fortalecer dichas herramientas mediante dos enfoques. El primero consistió en evaluar promotores para la expresión génica en Gox y Gfr utilizando mCherry como reportero. Se ensayaron promotores previamente descritos en acetobacterias (pJ23104 y pB932_2000) junto con dos promotores nuevos (pMD110 y p2703insG). Las construcciones plasmídicas obtenidas se introdujeron en ambas cepas y su actividad se midió mediante fluorescencia y análisis en geles. En Gox, pJ23104 mostró la mayor expresión, seguido por p2703insG y pMD110, tendencia que también se observó en Gfr. El promotor pB932_2000 no evidenció actividad detectable. Los análisis en gel bajo condiciones no reductoras confirmaron estos resultados al revelar intensidades de banda concordantes con los niveles de fluorescencia. El segundo enfoque buscó implementar un sistema CRISPR de interferencia (CRISPRi) en Gfr para reprimir el gen sldBA, asociado a la oxidación de glicerol. No obstante, dificultades en la obtención de las construcciones en E. coli DH5α sugieren problemas estructurales en el plásmido parental, indicando la necesidad de optimizar el diseño para lograr una aplicación efectiva. Estos avances contribuyen a expandir el repertorio molecular disponible para Gluconobacter y potencian su uso en biotecnología industrial.
Producción recombinante de la proteasa RgpB de Porphyromonas gingivalis y búsqueda de inhibidores
(Universidad ORT Uruguay, 2025) Gebelin Marusich, Nicole Lourdes; Fló Díaz, Martín; Manta Porteiro, Bruno; Ortiz Carrión, Cecilia Carolina; Abreu Olano, Cecilia
Porphyromonas gingivalis es uno de los patógenos claves en la periodontitis, una enfermedad inflamatoria, inmunológica y crónica que provoca la destrucción progresiva e irreversible de los tejidos de soporte dental. Entre sus principales factores de virulencia se destacan las gingipaínas, proteasas de cisteína con especificidad por arginina (RgpA y RgpB) o lisina (Kgp), responsables de la mayor parte de la actividad proteolítica extracelular. Estas enzimas participan en la degradación de proteínas y tejidos del hospedero, la adherencia y colonización de células epiteliales, la hemólisis, y la evasión de la respuesta inmune. Además, su presencia se ha asociado no solo a periodontitis, sino también a diversas condiciones sistémicas, como enfermedades cardiovasculares, Alzheimer, artritis reumatoide y complicaciones del embarazo. El creciente interés en el desarrollo de inhibidores específicos de gingipaínas como estrategia terapéutica motivó este Trabajo Final de Carrera, cuyo objetivo fue la producción recombinante de la proteasa RgpB con el fin de explorar una farmacopea de alta diversidad química en busca de inhibidores potenciales. Se expresó el zimógeno de RgpB de forma heteróloga en Escherichia coli, implementando múltiples estrategias de expresión y purificación para obtener una proteína soluble y activa, logrando un rendimiento de 0,92 mg por litro de cultivo. Este constituye el primer reporte exitoso de expresión de una gingipaína soluble y funcional en E. coli. Asimismo, se obtuvo la expresión recombinante de RgpB en células S2 de insecto, siendo este el primer antecedente en dicho sistema. Se desarrolló un ensayo de actividad enzimática basado en un sustrato fluorogénico, útil para futuras evaluaciones bioquímicas e in vitro. Finalmente, se realizó una búsqueda in silico de inhibidores, identificando tres compuestos candidatos pertenecientes a un espacio químico novedoso. El trabajo establece bases sólidas para la identificación y caracterización de inhibidores de RgpB con potencial farmacológico.