Puesta a punto de la expresión heteróloga de la enzima transglutaminasa microbiana de grado alimenticio en Lactococcus lactis
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Date
2018
Authors
Publisher
Universidad ORT Uruguay
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Abstract
La producción de alimentos fermentados es llevada a cabo a escala industrial con ciertas tecnologías introducidas a la producción de alimentos, dentro de estas se encuentra el desarrollo de aditivos que proporcionen nuevas características físicas y funcionales a los mismos. Uno de los aditivos más utilizados en la industria láctea, es la transglutaminasa microbiana, enzima capaz de generar el entrecruzamiento de proteínas derivadas de la leche. La transglutaminasa comercializada era obtenida únicamente de hígado de cobayos. Para facilitar el proceso, se llegó a la producción de la primera transglutaminasa microbiana en Streptomyces mobaraense, la cual (a escala industrial) se volvió más aceptada. Entre las limitaciones de este proceso se encuentran los elevados costos de purificación de la enzima necesarios para obtener un producto de grado alimenticio, generándole altos costos anuales a la industria láctea. Por esto, surge la necesidad de buscar una alternativa más económica para expresar la transglutaminasa microbiana en un microorganismo inocuo y libre de antígenos, como Lactococcus lactis. De esta manera, disminuirían los costos de purificación de la MTG, revalorando su precio en el mercado, afectando positivamente a la industria láctea en nuestro país. Las bacterias ácido lácticas son un grupo heterogéneo de microorganismos capaces de acidificar la leche debido a su capacidad de generar ácido láctico al fermentar el azúcar de la misma. Dentro de este grupo, se pueden encontrar microorganismos beneficiosos para el ser humano como por ejemplo Lacotoccocus lactis, considerado como organismos GRAS por la FDA. En el presente trabajo se propuso expresar de manera recombinante la transglutaminasa microbiana en Lactococcus lactis, utilizando el sistema de expresión NICE, el cual permite generar construcciones genéticas de grado alimenticio explotando la capacidad de auto-regulación por la bacteriocina nisina producida por L. lactis. Con este fin, se clonaron el gen reportero mcherry y los genes de interés, MTG total y maduro en plásmidos del sistema de expresión NICE, conteniendo diferente tipos de selección en la bacteria L. lactis. Por último, se evaluó la sobreexpresión de estas proteínas mediante su inducción con nisina. Finalmente se logra la sobreexpresión de la MTG en L. lactis incitanse a continuar con los estudios para lograr un producto de valor agregado para incorporar en el mercado.
En
Thesis note
Trabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Ingeniera en Biotecnología
86 p. diagrs., fot., tbls
Notes
Incluye bibliografía y anexos
Subject
SISTEMA DE EXPRESIÓN NICE, MICROORGANISMO LACOTOCCOCOUS LACTIS, BIOLOGÍA-MICROORGANISMOS, ENZIMAS, TECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS, PROYECTOS-BI
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Kaufmann Viera, V. B. (2018). Puesta a punto de la expresión heteróloga de la enzima transglutaminasa microbiana de grado alimenticio en Lactococcus lactis (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/3914