Expresión heteróloga y purificación de Green Fluorescent Protein para su atrapamiento en nanohíbridos con sílica biomimética

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Date
2015
Authors
Larrieux Idarreta, Natalia Carolina
Maresca Stewart, Francisco Javier
Publisher
Universidad ORT Uruguay
DOI
ISSN
ISBN
Abstract
El objetivo principal del presente proyecto fue alcanzar la expresión y purificación de una variante de la Green Fluorescent Protein (GFP) y su posterior atrapamiento en nanopartículas de sílica biomimética para generar nanohíbridos de sílica-GFP estables. La primera etapa implicó la generación de un sistema de expresión funcional para GFP en Escherichia coli que permitiera facilitar su purificación mediante un paso cromatográfico de afinidad. Luego se desarrolló un protocolo de purificación, que permitió recuperar la proteína con un rendimiento del 43,5% y un factor de purificación de 110,3. Como la GFP obtenida luego del procedimiento de purificación desarrollado poseía un alto grado de pureza, se procedió a su inmovilización en nanopartículas de sílica biomimética. Las nanopartículas de este material son fáciles de sintetizar, y tienen la capacidad de ser funcionalizadas de forma efectiva y atrapar biomoléculas, generando nanohíbridos con un rango más amplio de aplicaciones y funciones. Los nanohíbridos sintetizados fueron caracterizados morfológicamente mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM). Finalmente, se realizaron estudios preliminares de estabilidad de fluorescencia de la proteína obtenida, tanto inmovilizada como soluble, desafiándola en distintas condiciones de pH y de composición del medio, utilizando DMEM y PBS. Se determinó que tanto la proteína soluble como inmovilizada en los nanohíbridos disminuye su intensidad de fluorescencia luego de 20 horas de incubación en DMEM o PBS.
En
Thesis note
Trabajo de Grado (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Licenciado en Biotecnología
53 p. il., fot., tbls., grafs
Notes
Incluye bibliografía e índice de abreviaturas
Subject
PROYECTOS-BI, PROTEÍNAS, NANOTECNOLOGÍA, CROMATOGRAFÍA
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Maresca Stewart, F. J. (2015). Expresión heteróloga y purificación de Green Fluorescent Protein para su atrapamiento en nanohíbridos con sílica biomimética (Trabajo de Grado). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/3179
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