Nanoanticuerpos contra epítopes nativos

Abstract

El siguiente trabajo final de carrera se enfoca en la producción de herramientas asociadas a la producción de nanoanticuerpos contra proteínas trasmembrana. El objetivo es hacer una puesta a punto de inmunoensayos y otras estrategias compatibles con la plataforma de “Phage Display” para la generación de nanoanticuerpos contra epitopes conformacionales en proteínas de membrana. Se generaron transfectantes transitorias que sobreexpresan dos tipos de proteínas de membrana diferentes: la proteína multipaso C5aR1 y la simplepaso TIM3. Estas células se congelaron, generando un banco para uso futuro en estrategias de “panning” y “screening” de VHHs. Por otro lado, se establecieron estrategias de “screening” basadas en ensayos de ELISA para aislar aquellos clones de VHHs inhibidores de interacciones receptor/ligando, tomando en cuenta que no siempre es posible obtener las interacciones nativas utilizando este tipo de ensayos. Se pusieron a punto con éxito ELISAs de unión de dos pares receptor-ligando, FGL1-LAG3 y TIM3-Gal9, eligiendo las condiciones óptimas para ser capaces de visualizar la inhibición provocada por los distintos VHHs que serán seleccionados en etapas futuras. Por último, se comenzó con la preparación de la biblioteca de VHHs, obteniendo cantidades suficientes de glóbulos blancos de sangre periférica. Ya que para visualizar el alcance y éxito de las estrategias desarrolladas en este trabajo , hace falta continuar con la generación de la biblioteca de VHHs y realizar las estrategias de “panning” y “screening” puestas a punto en este trabajo.