Generación y caracterización de líneas celulares reporteras de la actividad del factor de transcripción nuclear factor kappa-b

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Date
2014
Authors
Mastropietro García, Giuliana Paula
Publisher
Universidad ORT Uruguay
DOI
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Abstract
En el presente trabajo se obtuvo una línea celular reportera de la actividad del Nuclear Factor Kappa-B (NF- κB) derivada de la línea parental Caco-2. Esta se caracterizó junto con la línea celular HT-29-pNF-κB-hrGFP, previamente generada en el laboratorio, y se comparó la respuesta de ambas frente a estímulos pro-inflamatorios. Para la generación de la línea reportera, se procedió a transfectar establemente con el plásmido pNFκB-hrGFP, que contiene el gen que codifica para la proteína GFP bajo el control de un promotor con múltiples sitios de unión a NF-κB, y luego se seleccionó con higromicina. Posteriormente, las fracciones celulares que respondieron a estímulos pro-inflamatorios fueron enriquecidas y clonadas mediante un separador celular. En aquellos clones seleccionados, se estudió, mediante citometría de flujo, la cinética de activación de NF-κB (porcentaje de células positivas para GFP) y su respuesta frente a diferentes concentraciones de los estímulos: Factor de Necrosis Tumoral-κ (del inglés, TumorNecrosisFactor-κ), Interleuquina-1βy Lipopolisacárido. Se observó una respuesta diferencial frente a los estímulos, incluso en clones de la misma línea, tanto en la curva dosis respuesta, como en la cinética de activación. Actualmente, se dispone de dos líneas reporteras bien caracterizadas, lo que permitirá monitorear compuestos moduladores de la vía NF-κB en estudios comparativos entre ambas.
En
Thesis note
Trabajo de Grado (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Licenciada en Biotecnología
74 p. il., tbls., grafs.
Notes
Incluye bibliografía
Co-tutores: Karen Perelmuter Schein y María Inés Tiscornia Roble
Vencimiento de confidencialidad: 24/04/2016.
Subject
CACO-2, CITOQUINAS PRO-INFLAMATORIAS, FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NF-ΚB, LÍNEAS CELULARES REPORTERAS, HT-29, PROYECTOS-BI
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Mastropietro García, G. P. (2014). Generación y caracterización de líneas celulares reporteras de la actividad del factor de transcripción nuclear factor kappa-b (Trabajo de Grado). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/3013
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