Expansión de herramientas moleculares para expresión de proteínas en Gluconobacter

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Date
2023
Authors
Dalies Sena, Malena
Publisher
Universidad ORT Uruguay
DOI
ISSN
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Abstract
El presente trabajo final de carrera llevó a cabo una búsqueda de antecedentes del uso de promotores en Gluconobacter y géneros relacionados. Se encontró el promotor constitutivo J23104, exitosamente utilizado en acetobacterias para inducir la expresión de un gen reportero; los promotores constitutivos p2703 y pB932_2000, para G. oxydans WSH-003; y el promotor inducible pBAD. Además, se generaron dos promotores nuevos para G. oxydans utilizando herramientas bioinformáticas. Mediante un análisis del genoma de Gluconobacter oxydans NBRC 14819 utilizando el software PePPER y la creación de un programa para obtener secuencias consenso se diseñaron los promotores pMD108 y pMD110. A partir de estos enfoques se generó una librería de promotores candidatos para G. oxydans y G. frateurii. En paralelo, se utilizaron herramientas de biología molecular para diseñar una estrategia de evaluación experimental de la librería de promotores. Esto implicó el diseño in silico y construcción de vectores backbone conteniendo el gen reportero mCherry, regulado por un promotor que se encuentra flanqueado por dos sitios de restricción, y un cassette de resistencia a antibiótico como marcador de selección. Se realizó una puesta a punto de metodologías de evaluación de la expresión del gen reportero. Se desarrolló un protocolo de lectura de la emisión de fluorescencia en un lector de placas, sumado a la observación de la señal fluorescente por microscopía confocal. Estas metodologías resultaron exitosas para diferenciar la expresión de la proteína entre las cepas tipo salvaje, las cepas conteniendo el plásmido backbone, y las cepas conteniendo el plásmido backbone sin mCherry.
En
Thesis note
Trabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Ingeniera en Biotecnología
138 p. tbls., grafs.
Notes
Incluye bibliografía y anexos
Subject
PROYECTOS-BI, BIOLOGÍA MOLECULAR-GENES, MARCADORES DE SELECCIÓN, GLUCONOBACTER
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Dalies Sena, M. (2023). Expansión de herramientas moleculares para expresión de proteínas en Gluconobacter (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería.
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