Puesta a punto de la producción y purificación de partículas similares a virus del Circovirus Porcino tipo 2 como prototipo vacunal

Abstract

En este trabajo de grado se realiza la puesta a punto de la producción de Partículas Similares a Virus (VLPs) de Circovirus Porcino tipo 2 (PCV2) mediante la transfección transitoria de la línea celular de mamífero Expi293F, utilizando el método de polietilenimina (PEI). Se optimizó el proceso mediante evaluación del rendimiento incluyendo, tiempos de transfección, concentración de ADN utilizada y desarrollo de diferentes métodos de purificación. Mediante estudios bioquímicos y biofísicos se realizó la caracterización de la proteína Cap de PCV2 y de las VLPs purificadas. También se realizaron ensayos de inmunofluorescencia indirecta y se evaluó la antigenicidad de las VLPs mediante ELISA utilizando sueros de porcinos infectados, no infectados y vacunados. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. En conjunto, los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala de laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. Los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal.