Puesta a punto de la producción y purificación de partículas similares a virus del Circovirus Porcino tipo 2 como prototipo vacunal
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Date
2023
Authors
Publisher
Universidad ORT Uruguay
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Abstract
En este trabajo de grado se realiza la puesta a punto de la producción de Partículas Similares a Virus (VLPs) de Circovirus Porcino tipo 2 (PCV2) mediante la transfección transitoria de la línea celular de mamífero Expi293F, utilizando el método de polietilenimina (PEI). Se optimizó el proceso mediante evaluación del rendimiento incluyendo, tiempos de transfección, concentración de ADN utilizada y desarrollo de diferentes métodos de purificación. Mediante estudios bioquímicos y biofísicos se realizó la caracterización de la proteína Cap de PCV2 y de las VLPs purificadas. También se realizaron ensayos de inmunofluorescencia indirecta y se evaluó la antigenicidad de las VLPs mediante ELISA utilizando sueros de porcinos infectados, no infectados y vacunados. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. En conjunto, los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal. Se logró optimizar la producción de VLPs a escala de laboratorio, poniendo a punto distintas condiciones de transfección para la obtención de un mayor rendimiento de VLPs. Se evaluaron parámetros de viabilidad celular y consumo de glucosa para una mejora en los cultivos de producción. Además, se evaluaron dos métodos diferentes de purificación, por gradiente discontinuo de CsCl y cromatografía de intercambio iónico. Los resultados preliminares obtenidos contribuirán al bioproceso para una futura aplicación de VLPs de PCV2 como prototipo vacunal.
En
Thesis note
Trabajo de grado (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería
Thesis degree name
Licenciada en Biotecnología
71 p., il., tbls., grafs.
Notes
Subject
PROYECTOS-BI, VIRUS, CIRCOVIRUS PORCINO TIPO 2, PARTÍCULAS
Type
Trabajo final de carrera
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Citation
Fadel Silva, F. N. (2023). Puesta a punto de la producción y purificación de partículas similares a virus del Circovirus Porcino tipo 2 como prototipo vacunal (Trabajo de grado). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/6650