Establecimiento de modelos de epitelio intestinal en tres dimensiones

Abstract

El objetivo general de este proyecto consiste en generar y caracterizar modelos reporteros in vitro del epitelio intestinal empleando sistemas de cultivo en tres dimensiones, con el fin de contar con modelos cuya complejidad se asemeje más a los sistemas vivos. Para ello se estableció un protocolo de cultivo en 3D de la línea celular reportera HT-29-NF-κB-hrGFP y comparándose la capacidad de respuesta de los esferoides generados con la de un cultivo en monocapa (2D). Como otra alternativa 3D, se planteó el uso de células madre pluripotentes inducidas para su posterior diferenciación a organoides intestinales. En esta parte del trabajo se obtuvieron y caracterizaron células madres pluripotentes inducidas (iPSC) a partir de fibroblastos murinos de un modelo transgénico reportero para la actividad del factor de transcripción Nuclear Factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells. Los clones obtenidos fueron caracterizados por medio de la evaluación de la expresión de marcadores de pluripotencia y la generación de cuerpos embrionarios. Los resultados obtenidos demostraron una diferencia en la capacidad de respuesta de la línea celular reportera obteniéndose una menor sensibilidad a un estímulo pro inflamatorio en los esferoides comparado con su contraparte en monocapa. Fue posible obtener células madres pluripotentes inducidas, las cuales expresaron los marcadores de pluripotencia (Nanog, Oct-3/4, Sox2 y SSEA-1) y fueron capaces de generar cuerpos embrionarios. En cuanto a la función reportera, no fue posible detectar una respuesta de activación del NF-κB frente a un estímulo pro inflamatorio en iPSC, aunque sí en cuerpos embrionarios, lo que sugiere que este factor se encontraría inactivo en los estadios más indiferenciados.